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无菌检查方法验证方案

[所属分类:技术资料] [发布时间:2019-12-4] [发布人:] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

无菌检查方法验证

1. 概述
无菌检查是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。无菌检查工作量大、操作不规范、人员的知识匮乏、检查方法应用不当等都会导致试验失败，因此在对一个产品进行无菌检查之前应先对无菌检查方法进行验证。

2. 验证目的

2.1 确认所用的无菌检查方法适用于“本公司所有无菌产品”的无菌检查。

2.2 确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性以及检查方法的完整性。

2.3 通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即无菌产品的生产全过程进行质量监控。

3. 验证范围

“本公司所有无菌产品”的无菌检查。

4. 验证人员及职责
验证委员会负责验证项目的确定；
质控部负责该验证方案的起草及组织实施；
验证小组负责验证方案的审批；
质控部参与验证的实施及监督。
验证小组成员：

5. 文件准备和培训

5.1 检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。

5.2 培训

参加验证人员需进行本文件及下述内容的培训：
微生物知识、无菌检查及微生物检验操作培训。

6. 验证条件及验证时间安排

6.1 验证条件

000016.1.1 检验公用系统验证及仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。

000016.1.2 供试品 3批 ① ② ③

培养基及试剂：
氯化钠：临用前配成0.9%浓度的溶液

硫乙醇酸盐流体培养基批号：生产厂家：

TSB 批号：生产厂家：

000016.1.3 验证用菌株：微生物培养基质控品（来源：杭州微球科技有限公司）
金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】

菌种传代次数铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】
枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】

生孢梭菌【CMCC（B）64941】

白色念珠菌【CMCC（F）98001】

000016.1.4 无菌检验仪器及相关设备

压力蒸汽灭菌器型号：编号：

生化培养箱型号：编号：

霉菌培养箱型号：编号：

超净工作台型号：编号：

6.2 验证时间

验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动按下面时间安排完成。

年月日至年月日。

7. 验证依据：
《中国药典》2015年版二部附录无菌检查法方法验证试验、美国药典USP<71>。

8. 验证过程

8.1 培养基无菌性检查
每批培养基随机取不少于5支，培养14天，应无菌生长。

8.2 培养基灵敏度检查

8.2.1 操作
取每管装量为12mL的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100 CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌菌悬液各1mL，每种培养基各接种2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9mL的TSB的培养基3支，其中2支分别接种小于100 CFU的白色念珠菌悬液1mL，另1支不接种作为空白对照，培养5天，逐日观察结果。空白对照管无菌生长,加菌的培养基管均生长良好,判灵敏度检查合格。

8.2.2 检查结果

培养基	硫乙醇酸盐流体培养基（12mL/管）					TSB（9mL/管）
菌液	金黄色葡萄球菌	铜绿假单胞菌	枯草芽孢杆菌	生孢梭菌	空白	白色念珠菌	空白
1 #
2 #
备注：“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌

8.3 方法验证试验

8.3.1 样品处理：取经过EO灭菌的“彭氏多功能手术解剖器”“妇科剪”“取样器”“电极”“侧宫尺”样品，按物料进入净化区程序送入无菌室，用酒精擦拭表面后去掉最外层包装。将于人体接触的关键部位剪成1cm×3cm的片段装进100ml无菌广口瓶中制成样品备用。

8.3.2 直接接种法：取8支装量为12mL/支的硫乙醇酸盐流体培养基管，分别接入1 mL小于100cfu/ mL的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管，其中取一管倒入8.3.1样品瓶中，再倒入硫乙醇酸盐流体培养基浸没供试品，另一管作对照，置30～35℃培养3～5天；取2支装量为9mL/支的TSB培养基管，分别接入1 mL小于100cfu/ mL的白色念球菌，其中取一管倒入8.3.1样品瓶中瓶中，再倒TSB培养基浸没供试品，另一管作对照，置23～28℃培养3～5天。逐日观察结果。

8.3.3 检查结果

培养基	硫乙醇酸盐流体培养基（12mL/管）								TSB（9mL/管）
菌液	金黄色葡萄球菌		铜绿假单胞菌		枯草芽孢杆菌		生孢梭菌		白色念珠菌
组别	菌液	样品1	菌液	样品1	菌液	样品1	菌液	样品1	菌液	样品1
第一天
第二天
第三天
第四天
第五天
备注：“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌

培养基	硫乙醇酸盐流体培养基（12mL/管）								TSB（9mL/管）
菌液	金黄色葡萄球菌		铜绿假单胞菌		枯草芽孢杆菌		生孢梭菌		白色念珠菌
组别	菌液	样品2	菌液	样品2	菌液	样品2	菌液	样品2	菌液	样品2
第一天
第二天
第三天
第四天
第五天
备注：“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌

培养基	硫乙醇酸盐流体培养基（12mL/管）								TSB（9mL/管）
菌液	金黄色葡萄球菌		铜绿假单胞菌		枯草芽孢杆菌		生孢梭菌		白色念珠菌
组别	菌液	样品3	菌液	样品3	菌液	样品3	菌液	样品3	菌液	样品3
第一天
第二天
第三天
第四天
第五天
备注：“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌

培养基	硫乙醇酸盐流体培养基（12mL/管）								TSB（9mL/管）
菌液	金黄色葡萄球菌		铜绿假单胞菌		枯草芽孢杆菌		生孢梭菌		白色念珠菌
组别	菌液	样品4	菌液	样品4	菌液	样品4	菌液	样品4	菌液	样品4
第一天
第二天
第三天
第四天
第五天
备注：“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌

培养基	硫乙醇酸盐流体培养基（12mL/管）								TSB（9mL/管）
菌液	金黄色葡萄球菌		铜绿假单胞菌		枯草芽孢杆菌		生孢梭菌		白色念珠菌
组别	菌液	样品4	菌液	样品4	菌液	样品4	菌液	样品4	菌液	样品4
第一天
第二天
第三天
第四天
第五天
备注：“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌

9. 评价标准

参考中国药典非无菌微生物限度检查法、ISO 11737.1-2006美国药典USP<61>、GB/T19973.1-1995 GB15980-1995

检查法规定对验证结果进行判断：

与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。

10. 验证过程评价

验证过程中全程按无菌方法操作，菌液组培养基生长良好，样品组均生长良好，说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用空白对照均无菌生长，此次无菌验证试验无殊。

11. 验证结论

结论：

试验员/ 日期：评定人/日期：

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