无菌方法学验证方案

[所属分类:技术资料] [发布时间:2019-12-4] [发布人:] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

验证方案 

1  概述

通过验证以确认所采用的薄膜过滤无菌检查方法适用于**的无菌检查；根据样品特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准，并保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性，特制定本方案。

2  目的

通过验证确认适用于**的无菌检查的方法和条件。即确认供试品无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计的检验量及检验条件。

3  职责

   验证小组在各自职责范围内对本标准的实施负责。

4  内容

4.1  相关文件

序号	文件名称
1	《药品生产质量管理规范》
2	《药品GMP实施指南》
3	《中国药典》2015年版四部
4	《无菌方法学验证标准操作规程》
5	《培养基制备标准操作规程》
6	《无菌检验标准操作规程》

验证方法与结果

样品信息

4.2.2  培养基

胰酪大豆胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、硫乙醇酸盐流体培养基                 

4.2.3  试验用菌及菌液制备

菌种	接种至	培养条件	菌悬液制备
金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]	胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基	30～35℃培养18～24小时	用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]	胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基	30～35℃培养18～24小时
白色念珠菌[CMCC（F）98 001]	沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基	20～25℃培养24～48天
大肠埃希菌 [CMCC(B)44 102]	胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基	30～35℃培养18～24小时
生孢梭菌[CMCC（B）64 941]	硫乙醇酸盐流体培养基	30～35℃培养18～24小时
黑曲霉[CMCC（F）98 003]	沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基	20～25℃培养5～7天或直到获得丰富的孢子	加入3-5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，孢子悬液可保存在2〜8℃，在验证过的贮存期内使用。

4.2.4  试验方法

4.2.4.2  方法选择

本品为注射用粉针剂，依据《中国药典》2015年版四部通则无菌检查法的规定，确定本品采用薄膜过滤法。

4.2.4.3  检验量的确定

依据《中国药典》2015年版四部通则无菌检查法的规定，确定本品的检验数量为160支。其中样品检验40支，每种阳性对照各20支。

4.2.4.4  薄膜过滤法验证试验

（1）供试品阳性制备

每膜取本品20支，每支加0.1%蛋白胨水溶液2ml溶解过滤，再用100ml加入小于lOOcfu菌量的0.1%蛋白胨水溶液冲洗，最后加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌加硫乙醇酸盐流体培养基；枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉加胰酪大豆胨液体培养基）至滤筒内即得。

（2）阴性对照组制备

取0.1%蛋白胨水溶液40ml过滤，再用100ml0.1%蛋白胨水溶液冲洗，最后加硫乙醇酸盐流体培养基至滤筒内即得。

（3）阳性对照组的制备

加与供试品阳性同体积的硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌加硫乙醇酸盐流体培养基；枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉加胰酪大豆胨液体培养基）至滤筒内，再加入各种与供试品阳性等量的试验菌即得。

（4）培养

置规定温度培养（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌置30～35℃培养；枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉置20～25℃培养），培养时间不得超过5 天，观察各滤筒中的试验菌生长情况。

4.2.5  结果判定

与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检査方法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。

4.3  验证结果与评定

4.3.1  质量管理部负责起草验证操作规程，收集各项验证、试验结果的记录。报验证小组。

4.3.2  质量管理部负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，对验证结果的评审包括：

4.3.2.1  验证试验是否有遗漏。

4.3.2.2  验证实施过程中对验证方案有无修改，修改原因，依据以及是否经过批准。

4.3.2.3  验证记录是否完整。

4.3.2.4  验证结果是否符合标准的要求。

5  人员培训

5.1  本方案获得批准后，由方案起草人组织对确认小组的操作人员进行培训并考核，确认培训考核情况，确保能够正确实施验证方案。

5.2  将培训记录及考核成绩汇总表附在记录后。

6  附录