培养基适用性检查方案—哥伦比亚琼脂培养基

[所属分类:技术资料] [发布时间:2018-5-21] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

 

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

 

培养基适用性检查方案—哥伦比亚琼脂培养基

 

【培养基原理】

胰酪胨、肉胃蛋白酶水解物、心胰酶水解物提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，酵母浸出粉提供维生素，氯化钠提供适宜的生理环境，玉米淀粉有利于受损细菌的菌体修复，琼脂为凝固剂。

添加的庆大霉素为选择性抑菌剂，对革兰氏阴性细菌有一定的一致性。

【所需菌种】

生孢梭菌(Clostridium sporogenes) [CMCC(B)64941]

【检查方法】

涂布法，进行促生长能力

【特别注意】

此培养基分为干粉培养基与液体添加剂两部分，应在同一厂家购买，由于对照培养基不提供抑菌剂，所以进行验证时商品培养基也不应添加抑菌剂

【菌液制备与稀释】

挑取四代以内（含四代）的生孢梭菌鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，经30～35℃培养18～24h；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-6～10^-7)

【培养基制备】

   被检培养基：称取培养基8.8g于200ml纯化水中,混悬均匀,121℃高压灭菌15分钟,灭菌结束后摇匀,以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，倾注平板，凝固，备用。

   对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。

  （注意：此处制备的平板应使用适宜的方法进行干燥，可以在30-35℃培养箱中预培养4h进行干燥）

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液0.1ml分别加于预制好的干燥过的培养基平板中，最少接种两个平板。

2. 培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液，仅倾入培养基。

3. 对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。

4.置30～35℃培养箱中培养48-72h。

5.计数并观察菌落特征

【计算方法】

回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。

【判定依据】

若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，则判定合格。

培养基适用性检查记录

培养基名称	哥伦比亚琼脂培养基				批    号			20151029
培养基编号	M5602B				包装规格			250g/瓶
供货单位	山东拓普生物工程有限公司				检查日期			2015年11月02日
对照培养基批号	201510				报告日期			2015年11月05日
对照培养基来源	中国食品药品检定研究院				检验依据			中国药典2015版
检验操作程序：***********************************
检验项目：促生长能力
培养条件		温度：30-35℃      时间：50h
试验菌		代数	稀释级			被检培养基 cfu/皿			对照培养基		生长率
生孢梭菌 CMCC(B)64941		4	10-7			75	均值   79		72	均值   77	0.97
						83			81
结论		被检培养基适用性检查          合格         不合格   (注：若空白有细菌生长，则本次检查无效)
检查人		******		日期				2015年11月05日
复核人		******		日期				2015年11月05日