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培养基适用性检查方案——三糖铁琼脂培养基(TSI)
山东拓普生物工程有限公司
Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd
说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目
培养基适用性检查方案——三糖铁琼脂培养基(TSI)
【培养基原理】
胨、牛肉浸出粉提供微生物生长所需的氮源；氯化钠提供适宜的生理环境；乳糖、蔗糖和葡萄糖为选择性碳源；酚磺酞为酸碱指示剂，酸性变黄，碱性变红；硫代硫酸钠提供硫元素；硫酸亚铁提供铁元素；琼脂为凝固剂。
培养基中三种糖的含量至关重要，细菌发酵糖产生不稳定酸（多为丙酮酸），遇氧气容易被氧化，被氧化后剩余的酸会引起培养基pH的变化；葡萄糖仅有1g/L，细菌利用后近产生少量酸，所以斜面部分的少量酸因与氧气接触而被氧化无法明显影响pH，高层底部部分的酸因不与氧气接触而会影响pH变化；另蔗糖与乳糖含量较高，会产生大量的酸，在产酸量上足以弥补氧气氧化带来的影响；通过以上复杂的综合产酸情况而影响pH，使菌苔着不同颜色。
同时某些细菌会利用硫代硫酸钠产生硫化氢，硫化氢遇铁元素形成硫化亚铁，使菌落着黑色。
【所需菌种】
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]
乙型副伤寒沙门氏菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)50094]
【检查项目】
指示能力
【检查方法】
高层斜面穿刺划线，同步使用对照培养基与待检培养基
【菌液制备】
挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，无需稀释，之后进行穿刺+划线操作。
【培养基制备】
被检培养基：称取培养基6.34 g于100ml纯化水中,加热搅拌煮沸溶解1分钟，分装试管，121℃灭菌15分钟，灭菌后摆高层斜面。
对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。
【实验方法】
1. 培养基阳性组：
使用接种针（而非接种环）穿刺划线大肠埃希氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌，每种细菌接种两支试管。
2. 培养基阴性组：待检培养基与对照培养基同时各做一个空白对照，即不做穿刺接种。
3. 对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在试管壁做好分类标记。
4. 置30～35℃培养箱中培养18～24h。
5. 计数并观察菌落特征。
【判定依据】
菌落形态与对照培养基一致，则判定合格。
培养基适用性检查记录
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培养基名称 |
三糖铁琼脂培养基(TSI) |
批 号 |
20151029 |
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培养基编号 |
M0009B |
包装规格 |
250g/瓶 |
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供货单位 |
山东拓普生物工程有限公司 |
检查日期 |
2015年11月02日 |
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对照培养基批号 |
201510 |
报告日期 |
2015年11月03日 |
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对照培养基来源 |
中国食品药品检定研究院 |
检验依据 |
中国药典2015版 |
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检验操作程序：*********************************** |
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检验项目：指示能力检查 |
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培养条件 |
温度：30-35℃ 时间：20h |
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试验菌 |
代数 |
被检培养基 |
对照培养基 |
结论 |
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斜面 |
底层 |
斜面 |
底层 |
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乙型副伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50094 |
4 |
黑色 |
黑色 |
黑色 |
黑色 |
合格 |
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大肠埃希氏菌 CMCC(B)44102 |
4 |
黄色 |
黄色 |
黄色 |
黄色 |
合格 |
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结论 |
被检培养基适用性检查 合格 不合格
(注：空白有细菌生长，则本次检查无效) |
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检查人 |
****** |
日期 |
2015年11月03日 |
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复核人 |
****** |
日期 |
2015年11月03日 |
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