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培养基适用性检查方案—RV沙门菌液体增菌培养基

[所属分类:技术资料] [发布时间:2018-5-21] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

培养基适用性检查方案—RV沙门菌液体增菌培养基

【培养基原理】

大豆胨提供微生物生长所需的基本氮源，葡萄糖提供碳源，磷酸氢二钾与磷酸二氢钾提供缓冲环境联合氯化镁有利于修复受损细菌；孔雀绿对对数革兰氏阳性细菌有一定的抑制作用。

【所需菌种】

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]

乙型副伤寒沙门氏菌（Salmonella paratyphi B）[CMCC(B)50094]

【检查方法】

试管接种法，进行促生长能力检查和抑制能力检查。

【菌液制备与稀释】

1、乙型副伤寒沙门氏菌

挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含不大于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-6～10^-7)

2、金黄色葡萄球菌

挑取四代以内（含四代）菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含不少于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-5～10^-6)

【培养基制备】

被检培养基：称取本品27.1g于1L蒸馏水或去离子水中（可按比例增加或减少配制量），使用最高温度低于115℃灭菌30分钟,冷却。

对照培养基：按说明制备

另准备胰酪大豆胨琼脂培养基进行稀释菌悬液计数，培养基灭菌后置于44.5℃水浴保温待用。

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中，每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中，用于计数，每种细菌做两个平板。（注意：由于此处金黄色葡萄球菌菌悬液浓度稍高，建议倾注时选取下一个稀释梯度，即10^-6～10^-7）

2. 培养基阴性组：即空白对照，即不添加菌液。

3. 接种量计数：步骤1中的平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。

4. 培养条件：

30～35℃培养箱中培养18～24h

【观察记录方法】

参考下述，长情况

A．乙型副伤寒沙门氏菌

——试管浑浊，生长良好。

B. 金黄色葡萄球菌

——试管澄清透明，彻底抑制。

D．接种量计数＝计数培养基平均菌落数—计数培养基空白组菌落数

【判定依据】

乙型副伤寒沙门氏菌接种量在不大于100CFU,加菌的培养基试管生长良好且与对照培养基相似，空白管无菌生长，则判定促生长能力合格。

金黄色葡萄球菌接种量在不少于100CFU,加菌的培养基试管不生长且与对照培养基相似，空白管无菌生长，则判定抑制能力合格。

培养基适用性检查记录

培养基名称

RV沙门菌液体增菌培养基

批号

20180102

培养基编号

M2015B

包装规格

250g/瓶

供货单位

山东拓普生物工程有限公司

检查日期

2018年01月08日

对照培养基批号

201703

报告日期

2018年01月09日

对照培养基来源

中国食品药品检定研究院

检验依据

中国药典2015版

检验操作程序：***********************************

培养条件

温度：30-35℃ 时间：20h

试验菌

代数

稀释级

计数培养基

cfu/皿

被检培养基

cfu/管

对照培养基

结论

抑制能力检查

金黄色葡萄球菌

CMCC(B)26003

计数

10^-7

空白

均值

试管接种量

试管

10^-6

910

绿色

未生长

空白

绿色

未生长

空白

合格

绿色

未生长

绿色

未生长

绿色

未生长

绿色

未生长

促生长能力

乙型副伤寒沙门氏菌CMCC(B)10104

10^-7

空白

均值

绿色

肉汤浑浊

绿色

肉汤浑浊

合格

绿色

肉汤浑浊

绿色

肉汤浑浊

结论

被检培养基适用性检查 合格 不合格

(注：若空白有细菌生长，则本次检查无效)

检查人

******

日期

2018年01月09日

复核人

******

日期

2018年01月09日

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