GB 4789.2-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定

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山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
GB4789. 2 — 2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验 菌落总数测定
2016-12-23 发布 2017-06-23 实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局
发 布
GB4789. 2 — 2016
Ⅰ
前 言
本标准代替 GB4789. 2 — 2010 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》。
GB4789. 2 — 2016
1
食品安全国家标准
食品微生物学检验 菌落总数测定
1  范围
本标准规定了食品中菌落总数( Aerobicplatecount )的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2  术语和定义
菌落总数 aerobicplatecount
食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每 g ( mL )检样
中形成的微生物菌落总数。
3  设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
3. 1  恒温培养箱: 36℃±1℃ , 30℃±1℃ 。
3. 2  冰箱: 2℃~5℃ 。
3. 3  恒温水浴箱: 46℃±1℃ 。
3. 4  天平:感量为 0. 1g 。
3. 5  均质器。
3. 6  振荡器。
3. 7  无菌吸管: 1mL (具 0. 01mL 刻度)、 10mL (具 0. 1mL 刻度)或微量移液器及吸头。
3. 8  无菌锥形瓶:容量 250mL 、 500mL 。
3. 9  无菌培养皿:直径 90mm 。
3. 10 pH 计或
pH
比色管或精密
pH 试纸。
3. 11  放大镜或/和菌落计数器。
4  培养基和试剂
4. 1  平板计数琼脂培养基:见 A. 1 。
4. 2  磷酸盐缓冲液:见 A. 2 。
4. 3  无菌生理盐水:见 A. 3 。
5  检验程序
菌落总数的检验程序见图 1 。
GB4789. 2 — 2016
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图 1  菌落总数的检验程序
6  操作步骤
6. 1  样品的稀释
6. 1. 1  固体和半固体样品:称取 25g 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,
8000r / min~10000r / min 均质 1min~2min ,或放入盛有 225mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式
均质器拍打 1min~2min ,制成 1∶10 的样品匀液。
6. 1. 2  液体样品:以无菌吸管吸取 25mL 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶
(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1∶10 的样品匀液。
6. 1. 3  用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1∶10 样品匀液 1mL ,沿管壁缓慢注于盛有 9mL 稀释液
的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其
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混合均匀,制成 1∶100 的样品匀液。
6. 1. 4  按 6. 1. 3 操作,制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用 1 次 1mL 无菌吸管或
吸头。
6. 1. 5  根据对样品污染状况的估计,选择 2 个 ~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在
进行 10 倍递增稀释时,吸取 1mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取
1mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6. 1. 6  及时将 15mL~20mL 冷却至 46℃ 的平板计数琼脂培养基(可放置于 46℃±1℃ 恒温水浴箱
中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
6. 2  培养
6. 2. 1  待琼脂凝固后,将平板翻转, 36℃±1 培养 48h±2h 。水产品 30℃±1℃ 培养 72h±3h 。
6. 2. 2  如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层
琼脂培养基(约 4mL ),凝固后翻转平板,按 6.
2. 1 条件进行培养。
6. 3  菌落计数
6. 3. 1  可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以
菌落形成单位(
colony-formingunits , CFU )表示。
6. 3. 2  选取菌落数在 30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU
的平板记录具体菌落数,大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的
平均数。
6. 3. 3  其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释
度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以
2 ,代表一个平板菌落数。
6. 3. 4  当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
7  结果与报告
7. 1  菌落总数的计算方法
7. 1. 1  若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平
均值乘以相应稀释倍数,作为每 g ( mL )样品中菌落总数结果。
7. 1. 2  若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式( 1 )计算:
N =
􀰑 C
(
n 1 +0. 1 n 2 ) d
……………………( 1 )
式中:
N
———样品中菌落数;
􀰑 C ———平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
n 1
———第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;
n 2
———第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;
d
———稀释因子(第一稀释度)。
示例:
稀释度
1∶100 (第一稀释度) 1∶1000 (第二稀释度)
菌落数( CFU )
232 , 244 33 , 35
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N =
􀰑 C
(
n 1 +0. 1 n 2 ) d
=
232+244+33+35
[
2+ ( 0. 1×2 )]
×10
-2 =
544
0. 022 =24727
上述数据按 7. 2. 2 数字修约后,表示为 25000 或 2. 5×10
4 。
7. 1. 3  若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU ,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可
记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7. 1. 4  若所有稀释度的平板菌落数均小于 30CFU ,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数
计算。
7. 1. 5  若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。
7. 1. 6  若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU~300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于
300CFU 时,则以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7. 2  菌落总数的报告
7. 2. 1  菌落数小于 100CFU 时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
7. 2. 2  菌落数大于或等于 100CFU 时,第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前 2 位数字,后面用
0 代替位数;也可用 10 的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
7. 2. 3  若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。
7. 2. 4  若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
7. 2. 5  称重取样以 CFU / g 为单位报告,体积取样以 CFU / mL 为单位报告。
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附 录 A
培养基和试剂
A. 1  平板计数琼脂( platecountagar , PCA )培养基
A. 1. 1  成分
胰蛋白胨 5.
0g
酵母浸膏
2. 5g
葡萄糖
1. 0g
琼 脂
15. 0g
蒸馏水
1000mL
A. 1. 2  制法
将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节
pH
至 7.
0±0. 2 。分装试管或锥形瓶, 121 ℃ 高压灭菌
15min 。
A. 2  磷酸盐缓冲液
A. 2. 1  成分
磷酸二氢钾( KH 2 PO 4 ) 34.
0g
蒸馏水
500mL
A. 2. 2  制法
贮存液:称取 34.
0g 的磷酸二氢钾溶于 500mL 蒸馏水中,用大约 175mL
的 1mol / L 氢氧化钠溶
液调节
pH
至 7.
2 ,用蒸馏水稀释至 1000mL 后贮存于冰箱。
稀释液:取贮存液 1.25 mL ,用蒸馏水稀释至 1000 mL ,分装于适宜容器中, 121 ℃ 高压灭菌
15min 。
A. 3  无菌生理盐水
A. 3. 1  成分
氯化钠
8. 5g
蒸馏水
1000mL
A. 3. 2  制法
称取 8.
5g 氯化钠溶于 1000mL
蒸馏水中,
121℃ 高压灭菌 15min 。